➽細胞凍存步驟：

1.常規方法收集對數期的貼壁細胞或懸浮細胞于試管中；

2.确認所需凍存的細胞數量；

3.将所需凍存細胞收集于離心管中，1000rpm，5min離心，收集細胞沉澱，并棄掉上清液；

4.加入适量的無血清細胞凍存液于離心管中，加入量按照細胞保存濃度爲 5X105 至 1X107cells/ml密度，輕柔的混勻細胞，獲取細胞混合液；

5.将獲取的細胞混合液按照1~1.5ml/管，分裝于凍存管中；

6.将凍存管直接放入-80℃保存，可長期保存；

7.若需要放到液氮中長期保存，需先在-80度保存>12小時再轉入液氮罐。

➽細胞複蘇步驟：

1.從-80℃取出凍存細胞，立即放入37℃水浴鍋快速解凍；

2.待細胞混合液徹底解凍融化後，立即加入1ml細胞培養基，混合；

3.将混合液移至含有約5ml該細胞培養基的離心管中，1000rpm，5min離心，棄掉上清，獲取細胞沉澱；

4.加入适量的新鮮細胞培養基，輕柔混勻，并将混合液轉移至培養容器，觀察細胞狀态正常後，進行後續細胞培養工作。

➽儲存運輸：

常溫運輸，4℃保存，有效期 24 個月。

➽注意事項：

1. Y-Tec無血清細胞凍存液在凍存細胞分裝後，需要盡量縮短在外存放時間，操作完成後需盡快移入到-80℃超低溫冰箱中。

2. Y-Tec無血清細胞凍存液中含有DMSO成分，對于DMSO敏感的細胞株，以及非常規細胞株，比如原代細胞，幹細胞（ES 細胞）等特殊細胞類型，均需要在使用前試用是否可以直接用該産品凍存目的細胞，先對所凍存的胞進行至少爲期1-4周的該産品試驗性細胞冷凍保存培養，确認沒有任何問題後再進行正式大量凍存。

3. 爲了保證Y-Tec無血清細胞凍存液的細胞存活率，若-80℃超低溫冰箱經常開關，可能導緻保存溫度不能長期穩定在-80℃環境，這樣會導緻細胞存活率快速下降，可-80℃凍存12小時後，盡快轉入液氮罐中長期穩定保存。

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