細胞裂解

收集細胞（約1×10⁷個），加入0.5-1ml預冷裂解液，冰上孵育30分鍾(注意每10min混勻一次保證細胞充分裂解)，4℃ 12,000g離心15分鍾，取上清。

預清除(可選)

加入20-30μl Protein A/G珠，4℃旋轉孵育1小時，離心去除非特異結合蛋白（減少背景）。

抗體孵育

加入1-5μg特異性抗體，4℃緩慢旋轉孵育2-4h。

複合物沉澱

加入30-50μl預處理過的Protein A/G珠，4℃旋轉孵育2-4小時。

洗滌

離心（3,000rpm，3分鍾）收集珠子，用預冷裂解液洗滌3次（每次1ml），去除非特異吸附。

洗脫與檢測

加入2×SDS上樣緩沖液或者Elution buffer洗脫，煮沸5分鍾，離心後取上清進行WB或質譜分析。